Es werden hierzu wenige Kubikzentimeter eines sterilen Farbstoffes über einen vorher gelegten Venenweg in die Arm- oder Handvene appliziert. Der Farbstoff (Fluorescein und/oder Indocyanin-Grün) verteilt sich darauf im ganzen Körper und erscheint nach wenigen Sekunden auch in den Gefäßen des Auges. Während der Untersuchung sitzt der Untersuchte vor einer speziellen Kamera oder einem Laser-Scanning-System über das der Einstrom des Farbstoffes in die Gefässe des Auges oder in andere Schichten der Netzhaut digital aufgezeichnet wird. Es handelt sich hierbei um eine rein diagnostische Maßnahme und nicht um eine Heilbehandlung.
Nach erfolgter Untersuchung verfärbt sich die Haut durch den Farbstoff leicht gelblich. Diese Erscheinung verliert sich bald und innerhalb von 4-6 Stunden wird der Farbstoff über den Urin ausgeschieden, der dann eine auffallend gelbe Färbung aufweist.